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广州IgM纯化

时间:2020-10-27 17:11:44  来源:http://gz.saiboerbio.com/product640411.html

大部分IgM类广州抗体是优血蛋白不溶解水,故能用双蒸水透析广州IgM纯化。对这些溶解水的IgM类广州抗原能用饱和状态硫酸铵沉淀。沉淀后能够选用顆粒抵触层析法(疑胶过虑)进一步将IgM纯化。

顆粒抵触层析(size-exclusion chromatography)法又被称为碳分子筛层析或疑胶过虑,是运用微孔板疑胶分离出来不一样尺寸分子结构的抗原,可用以IgM纯化试品中IgG和IgM的分离出来,常见于对硫酸铵粗提物的进一步纯化。根据该法纯化个人所得抗原可用以Ig分子结构精彩片段的制取、FITC、生物素或同位素标记。


一、IgM纯化必须的原材料和实验试剂

1. 抗血清,杂交瘤肝腹水或其上清,硫酸铵沉淀粗提γ血蛋白。

2. 含0.02%NaN3 的硼酸缓冲液,PBS。

3. 透析袋;26mm×900Mm层析柱。

4. 适度圆孔筛的顆粒抵触(SE)疑胶(AcA Ultragel-或Sephacryl S-200(Pharmacia LKB)。

5. 蛋白质透析、SE层析和SDS-PAGE需要的别的实验试剂和器械。

二、IgM纯化的操作流程

1. 待获取试品11,000~13,000r/min(15,000~20,000×g),4℃或室内温度抽滤,除沉淀。

2. 上清液对双蒸水透析4℃24小时。

3. 11,000~15,000r/min 4℃ 或室内温度抽滤1h,留沉淀。

4. 制取SE凝胶层析柱,以硼酸缓冲液均衡。

5. 将流程3沉淀或饱和状态硫酸铵粗提γ血蛋白以3~5ml硼酸缓冲液融解,迟缓移液。

6. 以硼酸缓冲液过柱蛋白,并搜集100管(每管为柱床容积的1%),IgM在过柱液的di一个蛋白质峰。

7. 搜集Ig蛋白质峰,各自合拼,透析浓缩,紫外线光度计OD 280nm测量Ig成分,SDS-PAGE评定IgM纯净度。

8. 以1~50mg Ig/ml硼酸缓冲液置4℃或-70℃储存。

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