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优质广州抗体纯化中常见问题

时间:2021-1-13 3:00:00  来源:http://gz.saiboerbio.com/news540816.html

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 优质抗体纯化中常见问题


高质量抗体包含的规范:

1).抗体的纯度超出95%(这里的纯度是指有效抗体的含量而不是单纯的电泳原理纯度);

2).抗体的非特异(效价高);

3).抗体的可信性(4℃存储10天无沉淀,-20℃存储三年以上效价无明显变化,持续冻融10次无沉淀)。


2、ProteinA/G纯化的不利因素:

Protein A是一种橘黄色链球菌感染(Protein G是一种链球菌感染株)植物细胞蛋白质,能非特异地和人与哺乳类动物抗体(主要是IgG)的Fc区结合(有时结合小量IgM),因而可以提取出IgG抗体。但是Protein A/G却无法差别非特异IgG的Fc段还是非特异性IgG的Fc段,因而Protein A/G纯化出的是总的IgG蛋白。

肝硬化腹水中含有人体白蛋白、γ血蛋白、巨球蛋白、转铁蛋白、细胞及其残片、脂肪分解、实验鼠的各式各样杂蛋白(如分散化的鼠IgG、IgM),而大伙儿真正务必的抗体只占很少一部分(大约占15%左右);而抗血清中的有效抗体也只占总IgG的30%左右,别的都是无关紧要的IgG或不起作用的抗体;因而 Protein A/G纯化的抗体看上去“很纯”(电泳图),事实上真正有效的“目的抗体”单抗只市场占有率75%左右,(兔)多抗只市场占有率30%左右。

3、应用抗原体亲和纯化抗体的优势与劣势。

亲和纯化是抗体抗原体的结合,理论上应该是纯度较大 非特异最好的纯化方法,但是一般由于抗原体的获得难易度十分艰辛,因而 获得 高纯度的抗原体并并并不是一件非常简单的事情。在大家不能获得 高纯度的抗原体时亲和层析做出来的抗体也就不易那么纯了;除此之外亲和纯化时抗原体抗体的结合比较牢固,要想提取抗原体抗体就务必大幅降低过柱液的pH值,抗体(蛋白)在那麼低地pH下很容易变形溶解,危害是无法避免 的。故该类情况下纯化出的抗体可信性差,4℃存储1天便会出现小量沉定,持续冻融很容易导致沉定。

4、纯化出的抗体效价低的原因。


效价低是因为非特异抗体含量少;有沉定是因为抗体纯度不够,杂蛋白含量高,如果是亲和纯化的抗体,那么很有可能是由于纯化整个过程中,抗体遭到了危害,抗体的结构和特点有一定的变更导致的。

  

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